PCR- ի փորձերում ռեակտիվի անկայունացման մանրամասն բացատրություն

PCR- ի փորձերի մեջ ռեակտիվի անկայունացման մանրամասն բացատրություն:

PCR- ի փորձի մեջ, արձագանքման համակարգը ավելացնելուց հետո մենք ուշադիր ծածկում ենք կափարիչը եւ բազմիցս հաստատում ենք, որ կափարիչը փակ է, որպեսզի խուսափեք ռեակտիվի անկայունից խուսափելու համար: Բայց երբեմն մենք նույնպես կասկածներ ունենք. Մենք հաստատեցինք, որ կափարիչը սերտորեն փակ է, բայց փորձի ավարտից հետո ռեակտիվը դեռ գոլորշիանում է: ինչն է պատճառը?

Փաստորեն, ռեակտիվի անկայունացումը PCR փորձերի ամենատարածված խնդիրներից մեկն է, եւ կան բազմաթիվ գործոններ, որոնք ազդում են ռեակտիվների վիճակի վրա:

Գոլորշիացումը վերաբերում է դրան, PCR- ի փորձի ընթացքում արձագանքման լուծումը գոլորշիանում է բարձր ջերմաստիճանում, այնուհետեւ կոնդենսացնում է շշի պատի կամ վերին ծածկույթի վրա, կամ ուղղակիորեն լցվում է շիշի կափարիչի կամ ֆիլմի օդային բացը արձագանքման լուծման կենտրոնացման փոփոխության մեջ: Փոփոխություններ, արձագանքման լուծման չափը նվազել է, եւ ոմանք նույնիսկ գոլորշիացել են չորության մեջ, ինչը հանգեցնում է անվավեր փորձերի:

1. Թեժ կափարիչ ճնշում, ջերմաստիճան

PCR- ի փորձարկումներում մենք սովորաբար տաքացնում ենք կափարիչը `կանխելու ռեակտիվ գոլորշի: The եռուցվող կափարիչի ջերմաստիճանը սովորաբար ավելի բարձր է, քան արձագանքման լուծումը `գոլորշիների խտացումը կանխելու համար:

Ther երմային ցիկլերի ջեռուցման կափարիչները կարող են մոտավորապես բաժանվել հետեւյալ չորս տեսակների. Ոչ կարգավորելի ջեռուցման կափարիչներ, կարգավորելի ջեռուցման կափարիչներ եւ ավտոմատ ջեռուցման կափարիչներ: Կարգավորվող ջեռուցվող կափարիչը պարունակում է մատների ամուր սեղմում: Եթե ​​սերտորեն խստացվի, ռեագենտները գոլորշիանում են: Edge Evapation- ը կարող է նվազագույնի հասցնել `բարձրացնելով ճնշումը ջեռուցվող կափարիչի վրա: Երբեմն ծանրությունը կարող է պտտել խողովակը եւ շրջել գլխիկը: Նորմալ պայմաններում էլեկտրական խելացի ջեռուցման ծածկը կարող է ինքնաբերաբար հայտնաբերել տարբեր բարձունքների ծախսվող նյութեր, ինքնաբերաբար սեղմել սպառվող նյութերը, եւ ճնշումը միատեսակ եւ մշտական ​​է, եւ փորձարարական ճշգրտության բարելավում եւ փորձարարական ճշգրտության բարելավում:

2. Սպառելի նյութերի դեֆորմացիա

Գոլորշի արտահոսքի համար մարդկանց մեծամասնությունը կարծում է, որ տաք կափարիչի ճնշումը բավարար չէ: Տաք կափարիչի ճնշումը շատ կարեւոր է, բայց դա միայն մեկ կողմն է: Իրականում սպառվող նյութերը նույնպես շատ կարեւոր են:

PCR- ի բացման ափսեներ սովորաբար պատրաստված են պլաստիկ նյութերից, որոնք մեծապես ընդլայնվում եւ դեֆորմացվում են ջեռուցվելուց հետո: PCR մետաղական բազայի ջերմային ընդլայնման արագությունը, որն օգտագործվում է PCR- ի բաց ջրի ափսեը, չափազանց ցածր է, եւ PCR- ի բաց ջրի ափսեը ջերմային ընդլայնումից հետո չի կարող ընդլայնել ինքնաթիռի երկայնքով: Փխրուն վիճակը ստիպում է վերին ջերմային ծածկը չկարողանալով լիովին կապվել PCR- ի բացօթյա ափսեի մակերեսի հետ, ինչը հանգեցնում է անհավասար ջերմաստիճանի եւ ճնշման, պատճառելով Regent Evapation- ը PCR- ի բացման ափսեի եզրին եւ ազդել PCR- ի հայտնաբերման ազդեցության վրա:

3. Սպառելի նյութերը սերտորեն չեն կնքվում

Mal երմային կափարիչի եւ ծախսվող նյութերի խստությունը չի նշանակում, որ PCR խողովակի գլխարկը սերտորեն փակ է, եւ PCR- ի լավ ափսեի որակը անհավասար է: Բարձրորակ ծախսվող նյութեր, վարդակի եւ ծածկույթի մակերեսը հարթ են, եւ տուփի ծածկույթի հետեւում գտնվող կնիքը լավ է, եւ արտահոսքը հեշտ չէ: Անվանական ծախսվող նյութերն ունեն անհավասար ծիլեր եւ ճառագայթային գծեր, որոնք հեշտությամբ կարող են առաջացնել արտահոսք կամ նույնիսկ չորացնել:

Հետեւաբար, PCR- ի փորձարկումներում փորձեք ընտրել բարձրորակ եւ հարմար ծախսվող նյութեր: Միեւնույն ժամանակ, արձագանքման համակարգը կարող է ընդլայնվել `նվազագույնի հասցնելու համակարգի գոլորշիացման ազդեցությունը արձագանքման վրա: