Բջջային մշակույթների գաղտնազերծման հիմնական խորհուրդներ

Բջջային մշակույթների գաղտնազերծման հիմնական խորհուրդներ

Բջիջները շարունակում են իրենց նյութափոխանակությունը նորմալ աճի գործունեության ընթացքում, ինչը պահանջում է տարբեր պաշտպանական միջոցների մասնակցություն: Երբ ջերմաստիճանը իջնում ​​է -70 ° C- ից ցածր, պաշտպանությունը դադարեցնում է աշխատել: Հետեւաբար, ծայրահեղ ցածր ջերմաստիճան ունեցող միջավայրում բջիջները կարող են դադարեցնել իրենց նյութափոխանակության գործողությունները եւ մտնել քնած պետություն, որը թույլ է տալիս երկարաժամկետ պահեստավորել:

1. Փորձարարական նյութեր

Հիմքի նյութը.

Հիմնական մշակույթի միջին

Շիճուկ (սովորական FBS / NBS)

Ուլտրապույրի աշխատանքային սեղան

Ստերիլ Dimethyl Sulfoxide (DMSO)

Ստերիլ pbs ֆոսֆատ բուֆերային աղի լուծում

Խողովակային հրացան

Էլեկտրական խողովակային հրացան

Փորձերի պատրաստում

ա) սառեցման լուծման պատրաստում.

Ընդհանուր բջիջներ. 55% բազալային միջին + 40% Bovine շիճուկ (FBS / NBS) + 5% DMSO

Կենսական բջիջներ. 90% Bovine շիճուկ (FBS / NBS) + 10% DMSO

Պատրաստի Cryopreservation- ի լուծումը 15 մլ ցենտրիֆուգու խողովակի [NEST] եւ պահեք 4 ° C ջերմաստիճանում `հետագա օգտագործման համար:

բ) սառեցված լինելու համար բջիջների պատրաստում.

Նախքան բջիջները սառեցնելը, ընտրեք բջիջները լավ աճի կարգավիճակով եւ լոգարիթմական աճի փուլով եւ դրանք փոխարինեք թարմ միջինով 12-24 ժամ առաջ `բջջային վիճակը պահպանելու համար:

2. Փորձարարական կարգ

1. Դիտարկեք սառեցված բջիջների խտությունը, որը կազմում է մոտ 80% ~ 90%: Օգտագործեք Pipette Grand- ը `հին միջինը ձգտելու համար, ավելացնել ստերիլ pbs- ը` բջիջները 1-2 անգամ լվանալու եւ մնացած միջոցը մշակույթի միջավայրում հեռացնելու համար:

2. Ավելացնել համապատասխան քանակությամբ տրիպսինի կամ մարսողական հյութ, որպեսզի տրիպսինը մուտք գործի բջիջներ եւ դրանք դրեք նարդի մեջ: Դիտարկեք բջիջների վիճակը մանրադիտակի տակ. Cytoplasm- ը հետ քաշվում է, եւ բջիջներն այլեւս միացված չեն թերթերի: Այս պահին ավելացնել STOP լուծումը `մարսողության գործընթացը դադարեցնելու համար:

3. Նրբորեն պղպջակի բջիջները հուշում `բջջային կախոց ձեւավորելու համար` բջջային կախոցը 1000 RPM- ով `3-5 րոպե:

Վերացրեք գերբեռնվածը, ավելացրեք համապատասխան քանակությամբ սառեցման լուծույթ, եւ նրբորեն պղպեղը `բջիջները համատարած լինելու համար: Կարգավորեք բջջային խտությունը Cryopreservation Medie- ով `վերջնական խտությունը 5 × 106 / մլ ~ 1 × 107 / մլ:

4. Օգտագործեք pipette ատրճանակ `Cryogenic Tubes- ը առանձնացնելու համար ակնկալվող հզորության համաձայն եւ օգտագործեք ավտոմատ ծածկող մեքենա` գլխարկի եւ կնքելու համար:

5. Ստանդարտ Cryopreservation ծրագիրը սառեցված տեմպը -2 ° C- ից -2 ° C / MIN է, իսկ սառեցված բջիջները կարող են աստիճանաբար սառեցված լինել հետեւյալ քայլերի համաձայն. 4 ° C (20 րոպե) → - 20 ° C (30min) → -80 ° C ° C (գիշերակաց) → Երկարաժամկետ պահեստը հեղուկ ազոտի մեջ:

Այն կարող է նաեւ ուղղակիորեն պահվել սառնարանում -80 ° C- ի գիշերը, այնուհետեւ տեղափոխվել հեղուկ ազոտ, պահեստավորման համար:

Yongyue Medical- ը բարձր տեխնոլոգիաների ձեռնարկություն է, որը մասնագիտանում է R & D- ում, կենսաբժշկական սպառվող նյութերի արտադրություն եւ վաճառք: Խողովակների խորհուրդներ, պղպեղներ, PCR ափսե, բջջային մշակույթի արտադրանք եւ կենսաբանական այլ լաբորատոր նյութեր: Yongyue Medical- ը արժանի է ձեր վստահության եւ ընտրության: Բարի գալուստ խորհրդատվություն: